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不同的准备?洋葱种子萌发和直接分化对不定芽诱导的影响
时间:2019-04-05 01:59:48 来源:阜宁信息网 作者:匿名



不同制剂对洋葱种子萌发诱导和直接分化的影响

作者:未知

摘要:还测定了洋葱种子的萌发条件及其对PEG-8000处理的响应。还测定了不同生长调节剂制剂对洋葱不定芽分化的影响。

在前一年和同年,以洋葱种子为材料,采用培养皿滤纸辊法进行种子发芽试验;洋葱鳞茎作为外植体诱导不定芽。

结果表明,10%(w)PEG-8000处理可显着促进上海种子的萌发,发芽率为94.00%,发芽指数为0.89。

随着PEG-8000质量分数的增加,洋葱种子的发芽率,发芽势和发芽指数均下降。 50 d的低温分层和PEG-8000浸种可以显着促进当年新种子的萌发和沙子的积累。 d,用200 mg?L-1 PEG-8000浸泡4 h,萌发开始时间和萌发高峰期最长,萌发时间缩短约10 d。与对照相比,发芽势,发芽率和发芽指数分别增加。 475.00%,65.52%和93.75%对促进洋葱种子萌发的效果最好,PEG-8000浸种可以显着减少种子分层后腐烂种子的数量。

MS 6-BA 1.5 mg?L-1 2,4-D 1.0 mg?L-1 KT 0.1 mg?L-1被选为测试方案中的最佳培养基配方,分化率为56.56%。

关键词:洋葱;种子萌发; PEG-8000;直接分化;不定芽诱导

不同制剂对不定芽诱导对洋葱种子萌发和直接分化的影响

张丽娟曲继松朱倩楠李坤(宁夏农林科学院种质资源研究所,宁夏银川750002)

关键词:Allium v??ictorialis L。;种子萌发; PEG-8000;直接分化;不定芽诱导Allium v??ictorialis L.是百合科的多年生草本植物,是洋葱,鹿,洋葱等属,全植物可食用,是药物和食物的结合。它的洋葱味道浓郁,有清新的野味。它是一种罕见的山地野菜[1]。

近年来,由于其特殊的营养和药用价值,它受到越来越多的关注[2-4]。

洋葱生长环境特殊,供应周期短,季节性强,繁殖能力差,根系采集方法导致野葱资源严重受损,数量急剧减少[5- 7]。

洋葱的洋葱繁殖更加困难。在正常条件下,洋葱种子发芽缓慢,需要很长时间,并具有附加型休眠特性。

繁殖洋葱分株也很困难,很难获得大量的繁殖体[8]。

洋葱产业在中国仍然相对落后,无法充分有效地保证市场需求的扩大。

目前,关于中国洋葱繁殖的报道很少。洋葱种子的缓慢和不规则特征仍有待进一步改善。此外,组织培养是洋葱无性繁殖的方法之一。

作者将不同的生长调节剂配方应用于洋葱种子,并通过种子萌发试验筛选出最佳处理方法。通过不同培养基配方的应用,利用洋葱芽诱导,探索洋葱诱导洋葱芽直接分化的最佳培养基。为洋葱的性,无性繁殖和大规模人工驯化栽培提供参考。1材料和方法

1.1材料

洋葱种子来自吉林农业大学蔬菜检测基地,由吉林农业大学园艺学院宋树正教授鉴定。

发芽试验时间为2016年10月,试验1的种子是2015年收集的陈种子,试验2的种子是本季的新种子; 2017年4月中旬从宁夏农林科学院园林采集不定芽诱导葱花材料。全场栽培并在田间综合试验基地栽培(2015年10月,吉林引进) 。

1.2种子处理

将洋葱种子置于PEG-8000和PEG-8000的两个实验中,并且通过使用培养皿滤纸辊法进行种子发芽。

试验1:用2层无菌滤纸将洋葱种子均匀地分布在培养皿的中心。将CK的洋葱种子在去离子水中浸泡12小时,滤纸和种子分别为PEG-8000 10%(T1),20%(t2),30%(t3)和去离子水(CK,CK')。 )始终保持湿润,并将滤纸的两端卷起以形成卷。

在恒温培养箱中孵育,将温度设定为20°C,每天照射3 000 lx,持续10 h。

试验2:层压后的PEG-8000处理。

分层处理使用细砂作为介质,并用水反复洗涤细砂,并在105℃下灭菌24小时然后使用。

将干燥的种子浸入0.3%KMnO 4溶液中15分钟,用去离子水洗涤,并将种子与湿砂以1:3的体积比混合。用手将沙子水分分组保持并松散。 [9]放入拉链袋,储存在4°C的冰箱中。

在冷藏结束后,具体处理如表1所示,种子发芽方法与试验1相同。

每次处理50粒种子,3次重复。

1.3种子萌发的测定

种子萌发的标志是胚根长度为2毫米。

从种子开始发芽的那天起,每5天观察并记录种子发芽状态,及时取出发芽的种子并播种在作为培养基的灭菌细砂的幼苗盘中。

种子萌发连续5天被认为是萌发结束。

根据Li Chang等人的方法计算发芽开始时间,发芽率(GR),发芽指数(GI)和发芽势(GE)。 [10]。1萌发开始时间:指从萌发试验开始到第一次萌发开始的时间;

2发芽期:从种子萌发开始到最后一次种子萌发的总时间;

3发芽率(GR)/%=种子发芽总数/试验种子总数×100;

4发芽指数(GI)=Σ(Gt?Dt-1),其中Gt是t天内的发芽数,Dt是相应的发芽天数;

5发芽势(GE)/%=种子萌发高峰时的发芽种子数/试验种子总数×100;

使用Excel 2003和DPS 7.05对测试数据进行单向ANOVA,并通过最小显着差异法(LSD)比较差异显着性。

1.4不定芽诱导材料处理

用自来水冲洗洋葱外植体上的灰尘和土壤,用软刷和洗涤剂溶液刷去外植体表面,去除附着在表面上的一些细胞,并用流水冲洗40分钟[8]。

在超洁净的工作台上切割灯泡,将其放入75%酒精中30秒,然后将其浸入0.1%HgCl2溶液中8分钟,然后用无菌水冲洗6次,并用无菌滤纸吸干外植体。水分,去除与消毒剂接触的伤口部位,并将幼球切成0.5-0.8厘米的部分用于接种。

培养基的制备:以MS培养基为基本培养基,0.7%琼脂,3%蔗糖,pH调至5.8,加入生长调节剂,用不同浓度的生长调节剂(6-BA和2,4-D)处理,培养基配方如表4所示。

在组织培养瓶中培养,每瓶30mL培养基,每瓶2次接种,20次接种,3次重复。

培养条件:温度23℃,湿度65%;光照条件:首先进行暗培养14 d,转换为光照2 500 lx,光照期14 h /暗期10 h。

研究了开始分化不定芽的时间。 30天后,观察并计数不定芽的数量和生长。

不定芽分化率/%=不定芽诱导数/接种次数(去除污染)×100。

根据唐明[11]的研究结果,在不定芽诱导30天后对不定芽进行传代培养。 60天后,培养芽。高度约1.5厘米的坚固枝条生根并最终完成。洋葱芽分化的再生体系。2结果与分析

2.1种子萌发的测定

2.1.1不同质量分数的PEG-8000对洋葱种子萌发的影响从表2可以看出,CK',t1,t2的起始时间为50 d,CK和t3的萌发开始时间是60天; CK t3的萌发时间为20天,t1和t2的萌发时间为25天,CK'的持续时间为30天,最高萌发率为94.00%。 t2和t1,CK'和t2之间没有显着差异。没有显着差异,最低CK为72.67%;发芽指数最高为0.89,显着高于t2和CK'。 t2和CK'之间无显着差异,CK和t3的发芽指数较低,两者之间无显着差异。 。

从图1中可以看出,t2的萌发峰值为56-65 d,发芽势为70.00%;在61-70 d内,t1的萌发潜力为76.00%; t3和CK的萌发高峰为66.在~75d内,萌发势分别为72.00%和66.00%,t1的萌发势仍为最高,为74.00%。

10%和20%的PEG-8000处理的洋葱种子具有早启动时间,较短的发芽持续时间和较高的发芽率,而10%PEG-8000处理的发芽势和发芽指数显着高于20%PEG。 -8000治疗;在去离子水中浸泡12小时?洋葱种子萌发较早,但发芽持续时间较长; CK和30%PEG-8000处理的洋葱种子发芽较晚,发芽持续时间短,但发芽高峰期发芽率,发芽势和发芽指数最低。

2.1.2分层和PEG-8000浸种对洋葱种子萌发的影响在表3中,T 5萌发的开始时间最早,萌发开始于47 d,而萌发持续时间最短,仅63 d ; CK开始发芽最多。洋葱种子萌发高峰的长度,除PCK和PT3外,其他处理均在47-55天内。在此期间萌发潜力PT5为92.00%,PT4为80.00%,PT1。 PT2和PT3之间没有显着差异。最低PCK为16.00%。 PT5的发芽率最高,发芽率和发芽指数最高,分别为96.00%和0.93。 PT4和PT5之间没有显着差异,其次是PT3,PT2和PT1,PCK。发芽率和发芽指数最低,分别为58.00%和0.48; PT1具有最大数量的腐烂物种,6.67,并且PT5具有最少数量的腐烂物种,1.67。可以看出,洋葱种子50 d和PEG-8000浸泡的低温分层可以显着促进洋葱种子的萌发,从而提高萌发开始时间和萌发峰值,显着提高发芽率,萌发潜力和发芽指数,而PEG-8000浸种可以显着减少种子分层后腐烂物种的数量。

将PT5处理即种子砂储存层在4℃的冰箱中储存50天,然后用200mg?L-1 PEG-8000浸泡4小时以促进洋葱种子的萌发。

2.2生长调节剂组合对洋葱不定芽诱导的影响

植物生长调节剂在洋葱直接分化和再生过程中是必不可少的,不定芽的产生与培养基中生长素(2,4-D)和细胞分裂素(6-BA)的比例有关。在组合使用的情况下,不定芽分化对洋葱的影响存在很大差异。

MS培养基诱导球茎直接分化成不定芽,并在培养15天后开始从切口边缘生长出淡黄色的芽(图2)。

从表4可以看出,当2,4-D质量浓度低(1.0 mg?L-1)且6-BA质量浓度为1.5 mg?L-1(ST2)时,芽的诱导和生长是最多的。优异,高于(ST1,2.0mg?L-1)且低于(ST3,1.0mg?L-1),该浓度显着不同;当2,4-D质量浓度较高(2.0 mg?L -1)时,6-BA质量浓度为1.5 mg?L-1(ST4)的芽的诱导和生长明显优于1.0 mg? L-1(ST5);然而,ST2和ST4并未开始区分。显着差异,ST2的不定芽分化率(56.56%)和茎芽高度(3.86 mm)显着高于ST4,并且生长也明显优于ST4。

可以看出,ST2的生长调节剂组合,即MS 6-BA 1.5 mg?L-1 2,4-D 1.0 mg?L-1 KT 0.1 mg?L-1培养基配方具有快速的不定芽分化和许多芽。生长条件好,分化率高,最适合洋葱不定芽的诱导和生长。表4不同生长调节剂组合对洋葱芽的诱导和生长的影响

[治疗ρ(生长调节剂)/

(mg?L-1)开始分化

时间/d不定芽

率/%茎芽

高度/mm生长条件6-BA 2,4-D KT ST1 2.0 1.0 0.1 18.33 A 9.44 E 1.56 E弱点()ST2 1.5 1.0 0.1 14.67 C 56.56 A 3.86 A Stout()ST3 1.0 1.0 0.1 17.67 AB 33.78 C 2.00 C中()ST4 1.5 2.0 0.1 15.33 C 40.44 B 3.27 B加厚()ST5 1.0 2.0 0.1 18.00 A 18.89 D 1.86 D薄()]

[注意]增长情况用“”表示。越“越”,增长越好。

3讨论和结论

?洋葱种子在正常条件下发芽缓慢,需要很长时间,种子自然具有较弱的繁殖能力。

王明奇等[12]研究了洋葱种子的萌发受温度因素的影响很大,建议选择20℃的最佳温度进行萌发。

张忠宝等[6]研究? Y果实证明洋葱种子中有抑制种子萌发的物质,抑制剂不仅可以抑制其他种子的萌发,而且对自身有抑制作用。种子长期休眠的重要原因之一。

宋发军等[13]研究了不同质量分数的PEG-4000,PEG-6000,PEG-8000和PEG-10000对华中楼种子萌发的影响,其中25%PEG-4000和25%PEG-8000浸种可以有效地打破华中楼种子的休眠,促进种子萌发。

张忠宝等[14]的结果可以通过低温分层30-45天和激素处理(GA3 100-150 mg?L-1,NAA 5 mg?L-1)显着提高洋葱种子的发芽率。持续24小时。 。在作者的研究中,前一年洋葱种子的种子可以在没有其他处理的情况下正常发芽,但发芽开始时间晚(60天),持续时间长(80天)。比较了发芽率,发芽势和发芽指数。去离子水浸泡和PEG-8000处理后12小时低,可促进洋葱种子的萌发。浸泡种子可以使萌发开始时间提前。随着PEG-8000质量分数的增加,洋葱种子的发芽率,发芽势和发芽指数降低,10%的PEG-8000处理可显着促进洋葱种子的萌发;新种子不能在同一年发芽,但低温分层50 d和PEG-8000浸泡能显着促进?洋葱种子的萌发提高了种子分层后的发芽率,发芽势和发芽指数,显着减少了腐烂种子的数量。

将种子砂在4℃的冰箱中保存50天,然后用200mg?L-1 PEG-8000浸泡4小时以促进洋葱种子的发芽。

在两次发芽试验中,洋葱种子的萌发时间短于唐明[11],王明熙[12],张忠宝等[13],萌发高峰期推进。

同时,将发芽的种子播种在细砂的幼苗盘中作为幼苗的培养基,所有种子都能正常出苗,生长没有差异。

洋葱芽诱导是组织培养快速繁殖中最重要的阶段。作者筛选了MS 6-BA 1.5 mg?L-1 2,4-D 1.0 mg?L-1 KT 0.1 mg?L-1,用于方案中的最佳培养基配方。

而刘霞等[11]中等成分的MS 6-BA 2.0 mg? L-1 2,4-D 1.0 mg? L-1 KT 0.1毫克? L-1(t1)适用于不定芽诱导试验结果存在差异,但理论相同,即芽的生长因6-BA和2,4-D比例的变化而发生变化。当6-BA的浓度低时,芽的生长小而小,具有6-BA。随着质量浓度的增加,生长变得更强,但在达到一定的质量浓度后,生长逐渐减弱。本试验优化了洋葱组织培养不定芽诱导期的培养基配方,为后续的不定芽增殖和生根奠定了基础。

引用

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